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SARS-CoV-2病毒的nsp3基因编码木瓜样蛋白酶（Papain-like protease，PLpro），该酶催化病毒多蛋白链水解产生复制酶，也催化蛋白的脱泛素反应，还跟其它脱泛素酶一样，能酶切LXGG多肽序列。由于SARS-CoV-2的PLpro在病毒成熟和致病机制中有重要作用，是重要的药物开发靶点，因此快速检测其酶活具有重要的意义，为此本公司开发了基于荧光光度法的PLpro活性检测试剂盒。

• 使用便捷，用户只需准备待测样本。
  
• 产品经过优化，节约用户自行优化的时间。
  
• 操作简单快捷，整个实验可以在1小时内完成。
  
• 本制品足够100次PLpro活性测定实验。
  
• 本制品只可用于科研。

• 首次使用本试剂盒时，需要配制PLpro底物工作液和PLpro阳性标准品溶液。
  
  • 配制PLpro底物工作液：将5mL PLpro底物稀释液加入到装有PLpro底物干粉的瓶中，摇晃混匀得到PLpro底物工作液。根据每次用量分装（如果每次要做10个样本测试，则按0.5mL/管分装）-20℃保存，每次取用。
    
  • 配制PLpro阳性标准品溶液：将0.5mL PLpro稀释液加入到装有PLpro干粉的瓶中，摇晃混匀得到PLpro工作液。没用完的需要放-20℃保存。
• 用实验变量处理细胞得到待测样本，或者直接将实验变量（如酶抑制剂）加入到待测样本中，然后将待测样本用PLpro稀释液稀释成适当浓度，如果不知道稀释度范围，需要先做预实验确定。
  
• 在常温下按下表设置反应。如果有N个样本，则需要设置N+2个反应，反应总体系为100μL：
  

  步骤	空白对照	N个样品	阳性对照
  PLpro底物工作液	50μL	各50μL	50μL
  PLpro底物稀释液	50μL	-	-
  处理后的待测样本	-	各50μL	-
  PLpro阳性标准品	-	-	50μL

• 放入荧光光度计进行测定（激发波长选择490nm、发射波长选择520nm处）。如果用于动力学分析，则每5分钟读取一次各孔吸光度值（A），读取30～60分钟。如果用于终点法分析，则37℃保温30～60分钟。
  
• 数据分析前，将所有样本的荧光值RFU减去空白对照的RFU，得到有效RFU值。
  
• 动力学分析：用每个样本的RFU针对时间作图，确定线性区（一般在反应最初的10分钟以内），然后计算反应速度（RFU/分钟）。比较各样本之间的速度即可评估各种实验变量对该酶的影响。
  
• 终点分析：用每个样本的RFU针对实验变量作图即可评估各种因素对该酶的影响。